久久久久久亚洲精品,亚洲成av人片在线观看无,两个人免费完整版在线观看视频,亚洲熟妇色自偷自拍另类

技術(shù)文章 / article 您的位置:網(wǎng)站首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 限制性內(nèi)切酶的一般原則和建議

產(chǎn)品列表

PROUCTS LIST

限制性內(nèi)切酶的一般原則和建議

發(fā)布時(shí)間: 2022-06-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1642次
  限制性內(nèi)切酶的一般原則和建議
  DNA中加上酶,然后保溫一段時(shí)間就可以了。但是在實(shí)際操作過(guò)程中,我們不斷聽(tīng)到:切不動(dòng),裝不上。問(wèn)題在什么地方?能系列生產(chǎn)限制性內(nèi)切酶的公司國(guó)際上,就那么幾個(gè),位列前3的是NEB,Fermentas,SibEnzyme。這些公司提供酶的品質(zhì)一般都能得到保證。您可以懷疑酶的質(zhì)量問(wèn)題,但是更多的問(wèn)題來(lái)源于模板是否合適酶切要求。下面幾點(diǎn)對(duì)你的酶切是有幫助的。
  1)成功酶切的關(guān)鍵是準(zhǔn)備好模板DNA。DNA樣品中不能含有有機(jī)溶劑(會(huì)使酶變性或產(chǎn)生星號(hào)貨性),不能含有干擾酶活性的污染物質(zhì),不能含有高濃度的EDTA(TE中的EDTA濃度較低,對(duì)Mg的濃度影響較小);同時(shí)要對(duì)DNA甲基化程度及其對(duì)酶切效率的影響要做到心中有數(shù)。
  2)選用合適的酶。根據(jù)酶切序列選用,特別注意選用甲基化對(duì)酶活性的干擾。
  3)正確使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低溫環(huán)境中,只是在需要用酶才從冰箱中取出來(lái)。運(yùn)輸和臨時(shí)存放時(shí)需要將酶至于冰上。手拿酶管時(shí)不要接觸酶管下步含酶的部分,移酶時(shí)盡可能用長(zhǎng)TIP,避免污染。用完后需要及時(shí)送回原處。注意:酶通常是最后加。
  4)反應(yīng)體積需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?,常?guī)的酶切一般要維持在10-50ul,酶切鑒定10-20ul就可以了。
  5)模板濃度問(wèn)題:濃度過(guò)高,溶液黏度過(guò)大,酶不能有效擴(kuò)散,酶切效果不會(huì)好。濃度過(guò)低,也會(huì)影響酶活性。
  6)注意模板用量和反應(yīng)體積的關(guān)系。對(duì)酶用量,模板用量,反應(yīng)體積等要素的確定需要的是時(shí)間和經(jīng)驗(yàn)的積累。
  7)酶切反應(yīng)的各個(gè)組分加完后,需要用TIP小心混勻幾次,shortspin一下就可以保溫了。一般不能使用振蕩器混勻。
  8)反應(yīng)溫度的選擇。一般反應(yīng)都用37度,但是SmaI的適合溫度是25度,37度時(shí)酶仍表現(xiàn)出活性,但是效率下降50%。部分從耐熱菌制備的酶需要在37度以上的溫度反應(yīng),如TaqI的最適溫度為65度,37度保溫,效率僅為前者的1/10。
  9)反應(yīng)時(shí)間的選擇。一般酶切鑒定30分鐘就可以了。要*酶切可以采用少量的酶長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng),或較高的酶量短時(shí)間處理都可以達(dá)到。在使用高酶量的時(shí)候需要注意甘油的最終濃度不要超過(guò)5%,也就是說(shuō)10ul的體系,酶的用量不要超過(guò)1ul。
  10)是否和如何終止反應(yīng)?酶切鑒定之類(lèi)的實(shí)驗(yàn)不需要特殊處理。滅活的手段:加入高濃度的EDTA;65度或80度熱處理20-30分鐘;部分從高溫菌純化出來(lái)的內(nèi)切酶由于最適的反應(yīng)溫度比較高,熱處理滅活不一定*,需要用苯酚/氯仿/乙醇方法純化;電泳回收也是實(shí)驗(yàn)室常用除酶的手段。
在線客服 聯(lián)系方式

服務(wù)熱線

17317196276

国产精品无码中文在线av| 性久久久久久| 浴室高潮bd在线观看| 美女与野兽免费观看| 99re8在这里只有精品2| 特级毛片www免费版| japanese日本护士xxx| 网禁拗女在稀缺视频网站| 肉浦团在线观看| 重囗味sm在线观看无码| 特黄a级毛片| 亚洲色大成网站www| 国产精品视频一区二区三区不卡| 成人h动漫精品一区二区无码| 黑人一个接一个上来糟蹋| 学长边洗澡边把我处破了小说| 老师的粉嫩小又紧水又多a片视频| 被男人吃奶跟添下面特舒服| 军人的粗大(h)拔不出来| 热の综合热の国产中文网| 久久av| 无码人妻精品一区二区三区在线| 一尘网中国投资资讯网| 97人妻精品一区二区三区| 饥渴少妇a片aaa毛片小说| 肉伦娇喘连连蜜汁横流| 真人做愛三級片| 免费国产又色又爽又黄的网站| 国产精品成人一区二区三区无码| 金瓶梅杨思敏| 黑人巨大精品欧美一区二区免费| 国产午夜av无码无片久久96| 日日av夜夜添久久奶无码 | ten1819第一次处| 最近韩国电影高清免费观看hd| 老同学3免费完整版在线观看| 亚洲一区二区三区无码久久| 小13箩莉黄瓜自慰喷白浆| 偷看娇妻在别人胯下沦陷小说 | 三级国产三级在线| 日日噜噜噜夜夜爽爽狠狠|